مزايا استثنائية لاختبار ELISA فائق الحساسية مع دورة Thio-NAD في تحديد بروتين NS1 لحمى الضنك
1. مقدمة
حمى الضنك هي مرض معدٍ حاد يسببهفيروس الضنك من خلال لدغة بعوضة من جنس الزاعجة المصابة (Ae. aegypti أو Ae. albopictus)،مع الأعراض الرئيسية مثل الحمى المرتفعة، الدوخة، الصداع، الطفح الجلدي وشديد آلام (العين، العضلات، المفاصل، أو العظام)، وغيرها. ينتشر هذا المرض على نطاق واسع في المناخات الاستوائية وشبه الاستوائية. تشير التقديرات إلى إصابة 100 إلى 400 مليون شخص كل عام، حيث تكون أكثر من 80% من الحالات خفيفة وبدون أعراض عادةً. ومع ذلك، يمكن أن تزيد حمى الضنك الشديدة من خطر الوفاة إذا لم يتم علاجها بشكل صحيح. وبالتالي، فإن التشخيص المبكر لهذا المرض مهم لعلاجه في الوقت المناسب.من الجدير بالذكر أن البروتين غير الهيكلي 1 (NS1)، وهو بروتين سكري عالي الحفظ، يُفرز بشكل رئيسي أثناء الإصابة بـالضنكفيروس، والتي تُعتبر بشكل مكثف عامل الإمراض الرئيسي لـحمى الضنك. وبالتالي، يُستخدم NSI عمومًا كمؤشر حيوي للكشف المبكر عن هذا المرض.
في هذه الدراسة، تم استخدام اختبار الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم بنمط الساندويتش (ELISA) بالاشتراك معثيو نيكوتيناميد أدينين ثنائي النوكليوتيد (ثيو-NAD/S-NAD)طريقة التدوير (يُشار إليه فيما بعد باسم ELISA فائق الحساسية) يُستخدم للكشف عن NSI، يليه المقارنة مع NAAT لتأكيد دقة الكشف.
2. مزايا وعيوب طرق الكشف التقليدية لـحمى الضنك
حاليًا،هناك أربع طرق كشف رئيسيةللحصول على حمى الضنك.
العزل الفيروسي والتحديد لها خصوصية عالية ولكنها تستغرق وقتًا طويلاً، حيث تستغرق 5 أيام على الأقل. المستضد السريع الاختبار هو الأسرع والأكثر فعالية من حيث التكلفة بين الطرق الأخرى، ولكن الحساسية والخصوصية منخفضة نسبيًا. الاختبار المصلي القائم على IgM وIgG محدود بـ عدد أيام الإصابة، كماالـيجب تأجيل الاختبار حتى يصل مستوى الأجسام المضادة يرتفع إلى مستوى يمكن اكتشافه.
في العيادة، غالبًا ما يُستخدم NAAT لتحديدحمى الضنك بفضل حساسيته وخصوصيته العالية. ومع ذلك، فإن هذه الطريقة مكلفة وتتطلب جهدًا كبيرًا وعرضة للنتائج الإيجابية الكاذبة، ويجب إجراؤها بواسطة موظفين مدربين.للتغلب على عيوب هذه الطرق، طريقة كشف جديدةELISA فائق الحساسية هو المستخدم في هذه الدراسة.
3. سير عمل ELISA فائق الحساسية مع تدوير الثيو-NAD
زوج من الأجسام المضادةهو المستخدم لالتقاط بروتين NS1 في ELISA الساندويتش، والفوسفاتاز القلويهو الموسوم على الجسم المضاد الثانوي. بالإضافة إلى الأجسام المضادة، مشتق الأندروستيرون، 3α-هيدروكسيستيرويد ديهيدروجيناز، ثيو-NAD، وNADHإنقاذها بواسطة INT-747 المستخدم لبناء نظام دورة إنزيم ثيو-NAD. أثناء تفاعل دورة ثيو-NAD، يتراكم ثيو-NADH باستمرار بنمط الأعداد المثلثية ويمكن قياسه مباشرة عند امتصاص 405 نانومتر.
4. مقارنة اختبار ELISA فائق الحساسية وNAAT في الكشف عن بروتين NS1 لحمى الضنك
في NAAT، تكون 60 عينة إيجابية لحمى الضنك، و25 عينة سلبية. تراوحت قيمة عتبة الدورة (CT) لتلك العينات الإيجابية لحمى الضنك من 12.42 إلى 31.41.في اختبار ELISA فائق الحساسية، تكون 59 عينة إيجابية بشكل مماثل لنتائج NAAT، بينما تكون 25 عينة سلبية بشكل مماثل تمامًا لنتائج NAAT.بالمقارنة مع NAAT، تبلغ حساسية وخصوصية اختبار ELISA فائق الحساسية 98.3% و100% على التوالي (الجدول 2). من بين 60 عينة مؤكدة إيجابية لحمى الضنك بواسطة NAAT، هناك عينة واحدة فقط سلبية في اختبار ELISA فائق الحساسية. أظهرت بيانات NAAT أن العينة هي حالة عدوى بفيروس الضنك من النوع 4 بقيمة CT تبلغ 21.59. تتوافق نتائج اختبار ELISA فائق الحساسية بشكل شبه تام مع نتائج NAAT، بقيمة كابا تبلغ 0.972 (فاصل الثقة 95%: 0.917-1.0).
5. الخلاصة
Uطريقة ELISA فائقة الحساسية سهلة التنفيذ ولا تتطلب متدربين محترفين لتشغيلها. Tيمكن بدء الكشف فورًا بعد استلام عينة صغيرة. إنه مناسب بشكل خاص للكشف المبكر عنالضنكمرض في البلدان منخفضة الدخل.المراجع
Chen, Po-Kai et al. "Advanced Detection Method for Dengue NS1 Protein Using Ultrasensitive ELISA with Thio-NAD Cycling." Viruses vol. 15,9 1894. 8 Sep. 2023, doi:10.3390/v15091894مزايا المنتج وخصائصBONTAC ثيو-NAD/S-NAD
بونتاك هوواحدة من الشركات القليلة فيالصين التي يمكنها إنتاج ثيو-NAD، مع"Bonzyme" طريقة الإنزيم الكامل (صديق للبيئة; لا توجد بقايا مذيبات ضارة) و تقنية التنقية الفريدة "Bonpure" ذات الخطوات السبع. تدمج BONTAC البحث والتطوير والإنتاج والبيع، مع مصانع مملوكة ذاتيًا وعدد من الشهادات الدولية لضمان الجودة العالية والإمداد المستقر للمنتجات.
