مزايا استثنائية لجهاز ELISA فائق الحساسية مع دورة Thio-NAD في تحديد بروتين حمى الضنك NS1
1. مقدمة
حمى الضنك هي مرض معد حاد يسببهفيروس حمى الضنك من خلال لدغة بعوضة من نوع من بعوضة الأيديس (Ae. aegypti أو Ae. albopictus) المصابة،مع الأعراض الرئيسية مثل الحمى الشديدة، الدوار، الصداع، الطفح الجلديشديد آلام (آلام في العين، العضلات، المفاصل أو العظام)، وغيرها. هذا المرض منتشر على نطاق واسع في المناخات الاستوائية وشبه الاستوائية. يقدر أن ما بين 100 إلى 400 مليون شخص يصابون سنويا، حيث يكون أكثر من 80٪ منهم عادة خفيفين وبدون أعراض. ومع ذلك، يمكن أن تزيد حمى الضنك الشديدة من خطر الوفاة إذا لم تعالج بشكل صحيح. لذا، فإن التشخيص المبكر لهذا المرض مهم لعلاجه في الوقت المناسب.ومن الجدير بالذكر أن البروتين غير البنيوي 1 (NS1)، وهو بروتين جليكوبروتين محفوظ للغاية، يفرز بشكل رئيسي أثناء الإصابةحمى الضنكفيروس، والذي يعتبر بشكل مكثف العامل الرئيسي لسبب المرض فيحمى الضنك. لذا، يستخدم NSI عموما كمؤشر حيوي للكشف المبكر عن هذا المرض.
في هذه الدراسة، تم إجراء اختبار منشط مناعي مرتبط بإنزيمات السندويتش (إليسا) بالاقتران معثيو نيكوتيناميد أدينين ثنائي نيوكليوتيد (ثيو-ناد/س-ناد)طريقة ركوب الدراجات (وفيما بعد يسمى ELISA فائقة الحساسية) يستخدم للكشف عن NSI، يليه مقارنة مع NAAT لتأكيد دقة الكشف.
2. مزايا وعيوب طرق الكشف التقليدية لحمى الضنك
حاليا، تفيما يلي أربع طرق رئيسية للكشفل حمى الضنك.
عزل الفيروسات والتعرف عليه دقيق جدا لكنه يستغرق وقتا طويلا، ويستغرق على الأقل 5 أيام. ال المستضد السريع الاختبار هو الأسرع والأكثر كفاءة من حيث التكلفة بين الطرق الأخرى، لكن الحساسية والخصوصية منخفضة نسبيا. الاختبار المصلي المعتمد على IgM وIgG محدود ب عدد أيام الإصابة، كما يلي:اليجب تأجيل الاختبار حتى يصل مستوى الأجسام المضادة يرتفع إلى مستوى يمكن اكتشافه.
في العيادات، غالبا ما يستخدم NAAT لتحديدحمى الضنك وبسبب حساسيته العالية وخصوصيتها. ومع ذلك، فإن هذه الطريقة مكلفة، ومرهقة، وعرضة للإيجابية الزائفة، والتي يجب أن يقوم بها الموظفون المدربون.لتجاوز عيوب هذه الطرق، تم ابتكار طريقة جديدة للكشفELISA فائقة الحساسية هي تم تطبيقه في هذه الدراسة.
3. سير عمل ELISA فائقة الحساسية مع دورة thio-NAD
زوج من الأجسام المضادةهي يستخدم لالتقاط بروتين NS1 في الساندويتش ELISA، والفوسفاتاز القلويهي موضع علامة على الجسم المضاد الثانوي. بعيدا عن الأجسام المضادة، هناك مشتق أندروستيرون، ديهيدروجيناز 3α-هيدروكسي ستيرويد، ثيو-NAD، وNADHهي يستخدم لبناء نظام دورة إنزيمات ثيو-ناد. خلال تفاعل دورة ثيو-NAD، تراكم ثيو-NADH باستمرار بشكل أرقام مثلثة ويمكن قياسه مباشرة عند امتصاص 405 نانومتر.
4. مقارنة بين ELISA فائقة الحساسية وNAAT في الكشف عن بروتين الضنك NS1
في NAAT، 60 عينة إيجابية لحمى الضنك، و25 عينة سلبية لحمى الضنك. تراوحت قيمة عتبة دورة NAAT (CT) لتلك العينات المصابة بحمى الضنك بين 12.42 و31.41.في اختبار ELISA فائق الحساسية، 59 عينة إيجابية بشكل متوافق مع نتائج NAAT، في حين أن 25 عينة تكون سلبية تماما لنتائج NAAT.مقارنة ب NAAT، تبلغ حساسية ونوعية ELISA فائقة الحساسية 98.3٪ و100٪ على التوالي (الجدول 2). من بين 60 عينة مؤكدة من قبل NAAT مصابة بحمى الضنك، كانت عينة واحدة فقط سلبية في اختبار ELISA فائق الحساسية. أظهرت بيانات NAAT أن العينة هي حالة عدوى من النوع الرابع من DENV بقيمة CT تبلغ 21.59. نتائج اختبار ELISA فائق الحساسية تكاد تكون متوافقة تماما مع نتائج NAAT، بقيمة كابا تبلغ 0.972 (فاصل الثقة 95٪: 0.917-1.0).
5. الخاتمة
Uطريقة ELISA الحساسة سهلة التنفيذ ولا تتطلب متدربين محترفين للعمل. Tيمكن بدء الكشف فورا بعد استلام عينة صغيرة. وهو مناسب بشكل خاص للكشف المبكر عنحمى الضنكالمرض في الدول ذات الدخل المنخفض.المرجع
تشين، بو-كاي وآخرون. "طريقة متقدمة للكشف عن بروتين حمى الضنك NS1 باستخدام ELISA فائقة الحساسية مع دورة Thio-NAD." الفيروسات المجلد 15، 9، 1894. 8 سبتمبر 2023، doi:10.3390/v15091894مزايا وميزات المنتجبونتاك ثيو-ناد/إس-ناد
بونتاك هو oواحدة من المشاريع القليلة فيالصين الذي يمكنه إنتاج ثيو-ناد, مع"بونزيم" الطريقة الإنزيمية الكاملة (صديق للبيئة; لا توجد بقايا مذيبات ضارة) و تقنية تنقية فريدة من نوعها "بونبيور" ذات سبع خطوات. تدمج بونتاك بين البحث والتطوير والإنتاج والبيع مع مصانع مملوكة لذاتها وعدد من الشهادات الدولية لضمان جودة عالية واستقرار توريد المنتجات.
