القياس الكمي NAD + ومستقلباته في الأعصاب الوركي للفأر
مقدمة
تم التعرف على الأجزاء الحاسمة من نيكوتيناميد الأدينين ثنائي النوكليوتيد (NAD +) ومستقلباته في الشيخوخة والتنكس العصبي على نطاق واسع. لتحفيز التقدم نحو البحوث والتدخلات الكيميائية الحيوية التي تستهدف الشيخوخة والأمراض التنكسية العصبية ، من الأهمية بمكان تحديد NAD + ومستويات مستقلبه بدقة في مسار الإنقاذ NAD +. هنا ، يتم تطبيق طريقة LC-MS / MS قوية ودقيقة لتحديد NAD + ومستويات مستقلباته في العصب الوركي الطبيعي والمصاب.
قيود الطرق الحالية لقياس NAD + ومستقلباته
تواجه الطرق التقليدية لقياس NAD + ومستقلباته ، مثل HPLC-UV أو NMR أو الرحلان الكهربائي للمنطقة الشعرية أو المقايسات الأنزيمية اللونية ، تحديات مختلفة في الحساسية والانتقائية والقياس غير المباشر. بالنسبة لمقايسات LC-MS / MS الحالية لقياسات NAD + الخلوية أو الأنسجية ومستقلباته ، فلا يزال هناك العديد من الصعوبات التي يجب التغلب عليها ، مثل أوقات التشغيل الممتدة ، وسلوك الاحتفاظ الكروماتوجرافي الضعيف ، وأشكال الذروة غير المرضية. علاوة على ذلك ، يمكن تغطية مادة واحدة إلى ثلاث مواد فقط في مسار الإنقاذ NAD + بهذه الطرق.
تعديلات طريقة LC-MS / MS
على أساس فحوصات LC-MS / MS الحالية ، يتم إجراء التعديلات المتعلقة بالظروف الكروماتوغرافية والمصفوفة البديلة وظروف MS / MS. على وجه التحديد ، يتم استخدام 5 ميكرومتر من حمض الميثيلين فوسفونيك كمادة مضافة للطور المتحرك ، والتي تعزز صراحة شدة الإشارة وشكل الذروة. نظرا للطبيعة النظيفة والبسيطة نسبيا للعينات التي لا يتم تنظيفها أبدا وصغر حجمها ، يتم اختبار المياه فائقة النقاء كمصفوفة بديلة. بدلا من عمود الكروماتوغرافيا السائلة للتفاعل المحب للماء وعمود الكربوهيدرات المفرط ، يتم استخدام عمود Waters Atlantis Premier BEH C18 AX ، الذي تتيح تقنية السطح عالية الأداء MaxPeak HPS الفريدة (تخميل الجدار الداخلي للعمود ، وإزالة السطح المعدني) قابلية عالية للتكرار ، وتماثل الذروة ، وفصل خط الأساس لجميع التحليلات.إلى جانب ذلك ، تم تحسين ظروف MS لتقليل إشارة تداخل NAD + في قناة ريبوز ثنائي فوسفات الأدينوسين الدوري (cADPR) مع الحفاظ على استجابة cADPR وأحادي النوكليوتيد النيكوتيناميد (NMN) ، مع 4000 فولت لجهد رش الأيونات ، 450 درجة مئوية لدرجة حرارة السخان التوربيني ، 50 رطل لكل بوصة مربعة للغاز 1 ، 50 رطل لكل بوصة مربعة للغاز 2 ، 30 رطل لكل بوصة مربعة لغاز الستارة ، و 12 رطل لكل بوصة مربعة لغاز الاصطدام.
الكروماتوغرام التمثيلي لعينات الأعصاب (طبيعي مقابل المصاب)
تحقق جميع التحليلات الخمس فصلا أساسيا ، حيث يعد cADPR مؤشرا حيويا حساسا في نموذج التنكس العصبي. هنا ، يؤدي بضع المحور العصبي الوركي إلى التنكس المحوري ، مما يؤدي إلى انخفاض مستوى NAD + وارتفاع مستوى NMN في الأعصاب المصابة ، مما يؤدي إلى زيادة حوالي 2 ضعفا في نسبة NMN / NAD +. في الوقت نفسه ، تنخفض مستويات النيكوتيناميد (NAM) والريبوز ثنائي فوسفات الأدينوسين (ADPR) بنحو 2 أضعاف ، بينما يزداد مستوى cADPR بأكثر من 8 أضعاف. تتوافق هذه النتائج مع نتائج الأبحاث التي تم الإبلاغ عنها سابقا ، مما يتحقق من دقة طريقة LS-MS / MS المعدلة هذه في تحديد NAD + ومستقلباتها.
استنتاج
تتيح طريقة LC-MS / MS المعدلة هذه الفصل الأساسي الفعال ل NAD + و NMN و NAM و ADPR و cADPR في غضون فترة تشغيل قصيرة مدتها 5 دقائق ، مما يساهم في التشخيص المبكر لمختلف الاضطرابات العصبية وتطوير الأدوية للشيخوخة والأمراض التنكسية العصبية.
مرجع
Ma Y ، Deng L ، Du Z. تطوير والتحقق من صحة طريقة LC-MS / MS لقياس NAD + والمستقلبات ذات الصلة في الأعصاب الوركي للفئران وتطبيقها على نموذج حيواني لإصابة الأعصاب. J Chromatogr A. doi: 10.1016 / j.chroma.2024.464821
بونتاك ناد
بونتاك تم تكريسها للبحث والتطوير وتصنيع وبيع المواد الخام للإنزيم المساعد والمنتجات الطبيعية منذ عام 2012 ، مع مصانع مملوكة ذاتيا ، وأكثر من 170 براءة اختراع عالمية بالإضافة إلى فريق قوي للبحث والتطوير. تتمتع BONTAC بخبرة غنية في البحث والتطوير والتكنولوجيا المتقدمة في التخليق الحيوي ل NAD وسلائفها (على سبيل المثال. NMN و NR). هناك أنواع مختلفة من NAD التي يجب اختيارها ، بما في ذلك NAD ER Grade (إزالة الإندوكسين) ، NAD Grade I (IVD / المكملات الغذائية / مسحوق مستحضرات التجميل الخام) ، NAD Grade II (API / الوسيطات) و NAD Grade IV (إن وجد متطلبات أعلى على الذوبان) ، والتي يمكن توفيرها في شكل مسحوق مجفف بالتجميد أو مسحوق بلوري. يمكن أن يصل نقاء BONTAC NAD إلى أكثر من 98٪.
اخلاء المسؤوليه
تستند هذه المقالة إلى المرجع الوارد في المجلة الأكاديمية. يتم توفير المعلومات ذات الصلة لأغراض المشاركة والتعلم فقط، ولا تمثل أي أغراض للمشورة الطبية. إذا كان هناك أي انتهاك ، فيرجى الاتصال بالمؤلف للحذف. والآراء المعرب عنها في هذه المادة لا تمثل موقف مكتب الأمم المتحدة المتكامل لخدمات الاتصالات الأجنبية. لن تتحمل بونتاك تحت أي ظرف من الظروف المسؤولية أو المسؤولية بأي شكل من الأشكال عن أي مطالبات أو أضرار أو خسائر أو نفقات أو تكاليف ناتجة أو تنشأ بشكل مباشر أو غير مباشر عن اعتمادك على المعلومات والمواد الموجودة على هذا الموقع.