القياس الكمي NAD+ ومستقلباته في الأعصاب الوركي للفئران
مقدمة
تم التعرف على الأجزاء الحاسمة من نيكوتيناميد الأدينين ثنائي النوكليوتيد (NAD +) ومستقلباته في الشيخوخة والتنكس العصبي على نطاق واسع. لتحفيز التقدم نحو البحوث والتدخلات الكيميائية الحيوية التي تستهدف الشيخوخة والأمراض التنكسية العصبية ، من الأهمية بمكان تحديد NAD + ومستويات مستقلبه بدقة في مسار إنقاذ NAD +. هنا ، يتم تطبيق طريقة LC-MS / MS قوية ودقيقة لقياس NAD + ومستويات مستقلباته في العصب الوركي الطبيعي والمصاب.
قيود الطرق الحالية لقياس NAD + ومستقلباته
تواجه الطرق التقليدية لقياس NAD + ومستقلباته ، مثل HPLC-UV أو الرنين المغناطيسي النووي أو الرحلان الكهربائي للمنطقة الشعرية أو المقايسات الأنزيمية اللونية ، تحديات مختلفة في الحساسية والانتقائية والقياس غير المباشر. بالنسبة لمقايسات LC-MS / MS الحالية ل NAD + الخلوية أو الأنسجة وقياسات مستقلباته ، لا يزال هناك العديد من الصعوبات التي يجب التغلب عليها ، مثل أوقات التشغيل الممتدة ، وسلوك الاحتفاظ بالكروماتوجرافيا الضعيف ، وأشكال الذروة غير المرضية. علاوة على ذلك ، يمكن تغطية مادة واحدة إلى ثلاث مواد فقط في مسار إنقاذ NAD + بهذه الطرق.
تعديلات طريقة LC-MS/MS
على أساس فحوصات LC-MS / MS الحالية ، يتم إجراء التعديلات المتعلقة بالظروف الكروماتوغرافية والمصفوفة البديلة وشروط MS / MS. على وجه التحديد ، يتم استخدام 5 ميكرومتر من حمض الفوسفونيك الميثيلين كمادة مضافة للطور المتحرك ، والتي تعزز صراحة شدة الإشارة وشكل الذروة. نظرا للطبيعة النظيفة والبسيطة نسبيا لعدم أخذ العينات وصغر حجمها ، يتم اختبار المياه فائقة النقاء كمصفوفة بديلة. بدلا من عمود الكروماتوغرافيا السائلة للتفاعل المحب للماء وعمود الكربوهيدرات الفائق ، يتم استخدام عمود Waters Atlantis Premier BEH C18 AX ، والذي تتيح تقنية السطح الفريدة من نوعها MaxPeak HPS عالية الأداء (تخميل الجدار الداخلي للعمود ، والقضاء على السطح المعدني) قابلية التكاثر العالية ، وذروة التماثل ، والفصل الأساسي لجميع التحليلات.إلى جانب ذلك ، تم تحسين ظروف MS لتقليل إشارة تداخل NAD + في قناة ريبوز ثنائي فوسفات الأدينوزين الدوري (cADPR) مع الحفاظ على استجابة cADPR وأحادي نوكليوتيدات النيكوتيناميد (NMN) ، مع 4000 فولت لجهد الرش الأيوني ، و 450 درجة مئوية لدرجة حرارة سخان التوربو ، و 50 رطل لكل بوصة مربعة للغاز 1 ، و 50 رطل لكل بوصة مربعة للغاز 2 ، و 30 رطل لكل بوصة مربعة لغاز الستارة ، و 12 رطل لكل بوصة مربعة لغاز الاصطدام.
رسم الكروماتوجرام التمثيلي لعينات الأعصاب (طبيعي مقابل مصاب)
تحقق جميع التحليلات الخمسة فصلا أساسيا ، حيث يكون cADPR مؤشرا حيويا حساسا في نموذج التنكس العصبي. هنا ، يؤدي بضع محور العصب الوركي إلى التنكس المحوري ، مما يؤدي إلى انخفاض مستوى NAD + وارتفاع مستوى NMN في الأعصاب المصابة ، مما يؤدي إلى زيادة حوالي 2 ضعفين في نسبة NMN / NAD +. في الوقت نفسه ، تنخفض مستويات النيكوتيناميد (NAM) وريبوز الأدينوزين ثنائي الفوسفات (ADPR) بحوالي 2 أضعاف ، بينما يزداد مستوى cADPR بأكثر من 8 أضعاف. تتوافق هذه النتائج مع نتائج الأبحاث التي تم الإبلاغ عنها سابقا ، مما يتحقق من دقة طريقة LS-MS / MS المعدلة في تحديد NAD + ومستقلباته.
استنتاج
تتيح طريقة LC-MS / MS المعدلة هذه الفصل الفعال بين NAD + و NMN و NAM و ADPR و cADPR في غضون فترة تشغيل قصيرة مدتها 5 دقائق ، مما يساهم في التشخيص المبكر للاضطرابات العصبية المختلفة وتطوير الأدوية للشيخوخة والأمراض التنكسية العصبية.
مرجع
Ma Y، Deng L، Du Z. تطوير والتحقق من صحة طريقة LC-MS / MS لقياس NAD+ والمستقلبات ذات الصلة في الأعصاب الوركية للفئران وتطبيقها على نموذج إصابة الأعصاب. J Chromatogr A. doi: 10.1016 / j.chroma.2024.464821
بونتاك ناد
بونتاكتم تكريسها للبحث والتطوير وتصنيع وبيع المواد الخام للإنزيم المساعد والمنتجات الطبيعية منذ عام 2012 ، مع مصانع مملوكة ذاتيا ، وأكثر من 170 براءة اختراع عالمية بالإضافة إلى فريق قوي للبحث والتطوير. تتمتع BONTAC بخبرة غنية في البحث والتطوير والتكنولوجيا المتقدمة في التخليق الحيوي لNAD وسلائفها(على سبيل المثال. NMN و NR). هناك أنواع مختلفة من NAD ليتم اختيارها ، بما في ذلك NAD ER Grade (إزالة الندوكسين) ، NAD Grade I (IVD / المكملات الغذائية / مسحوق مستحضرات التجميل الخام) ، NAD Grade II (API / الوسيطة) و NAD Grade IV (إن وجد متطلبات أعلى على الذوبان) ، والتي يمكن توفيرها في شكل مسحوق مجفف بالتجميد أو مسحوق بلوري. يمكن أن يصل نقاء BONTAC NAD إلى أكثر من 98٪.
اخلاء المسؤوليه
تستند هذه المقالة إلى المرجع في المجلة الأكاديمية. يتم توفير المعلومات ذات الصلة لأغراض المشاركة والتعلم فقط ، ولا تمثل أي أغراض للمشورة الطبية. إذا كان هناك أي انتهاك ، يرجى الاتصال بالمؤلف للحذف. والآراء المعرب عنها في هذه المادة لا تمثل موقف الرابطة. لن تتحمل بونتاك تحت أي ظرف من الظروف المسؤولية أو المسؤولية بأي شكل من الأشكال عن أي مطالبات أو أضرار أو خسائر أو نفقات أو تكاليف ناتجة أو تنشأ بشكل مباشر أو غير مباشر عن اعتمادك على المعلومات والمواد الموجودة على هذا الموقع.