مزايا غير عادية ل ELISA فائقة الحساسية مع دورة Thio-NAD في تحديد بروتين حمى الضنك NS1

1. مقدمة

حمى الضنك مرض معد حاد يسببهفيروس حمى الضنكمن خلال لدغة بعوضة من نوع الزاعجة المصابة (Ae. aegypti أو Ae. albopictus) ،مع الأعراض الرئيسية مثل ارتفاع درجة الحرارة والدوخة والصداع والطفح الجلدي وشديدآلام (آلام العين أو العضلات أو المفاصل أو العظام) ، إلخ. ينتشر هذا المرض على نطاق واسع في المناخات الاستوائية وشبه الاستوائية. ويصاب ما بين 100 و 400 مليون شخص كل عام، وعادة ما يكون أكثر من 80٪ منهم خفيفين وبدون أعراض. ومع ذلك ، يمكن أن تزيد حمى الضنك الشديدة من خطر الوفاة إذا لم يتم علاجها بشكل صحيح. وبالتالي ، فإن التشخيص المبكر لهذا المرض مهم لعلاجه في الوقت المناسب.

والجدير بالذكر أن البروتين غير الهيكلي 1 (NS1) ، وهو بروتين سكري محفوظ للغاية ، يفرز بشكل رئيسي أثناء إصابةحمي الضنكفيروس، والذي يعتبر بشكل مكثف عامل التسبب الرئيسي في المرضحمى الضنك. ومن ثم ، يستخدم NSI بشكل عام كمؤشر حيوي للكشف المبكر عن هذا المرض.

في هذه الدراسة ، فحص الممتز المناعي المرتبط بإنزيم الساندويتش(اليسا)بالاشتراك معثيو نيكوتيناميد الأدينين ثنائي النوكليوتيد (ثيو-ناد / إس-ناد)طريقة ركوب الدراجات (يطلق عليه فيما يلي ELISA فائقة الحساسية) للكشف عن NSI ، متبوعا بالمقارنة مع NAAT لتأكيد دقة كشفه.

2. مزايا وعيوب طرق الكشف التقليدية لحمى الضنك 

في الوقت الحاضر ، رفيما يلي أربع طرق رئيسية للكشفمن أجل حمى الضنك.


يتميز عزل الفيروس وتحديده بخصوصية عالية ولكنه يستغرق وقتا طويلا ، ويستغرق 5 أيام على الأقل. اختبار المستضد السريع هو الأسرع والأكثر فعالية من حيث التكلفة بين الطرق الأخرى ، لكن الحساسية والخصوصية منخفضة نسبيا. يقتصر الاختبار المصلي القائم على IgM و IgG بعدد أيام الإصابة ، مثلاليجب تأجيل الاختبار حتى يرتفع مستوى الأجسام المضادة إلى مستوى يمكن اكتشافه.

في العيادة ، غالبا ما يتم تطبيق NAAT لتحديدحمى الضنكبواسطة الأوساخ من حساسيتها وخصوصيتها العالية. ومع ذلك ، فإن هذه الطريقة باهظة الثمن وشاقة وعرضة للإيجابية الخاطئة ، والتي يجب أن يقوم بها الموظفون المدربون.للتغلب على عيوب هذه الطرق ، طريقة كشف جديدةELISA فائقة الحساسية هي مطبق في هذه الدراسة.

3. سير عمل ELISA فائقة الحساسية مع ركوب الدراجات thio-NAD

زوج من الأجسام المضادةهلتستخدم لالتقاط بروتين NS1 في الساندويتش ELISA والفوسفاتيز القلويهلالمسمى على الجسم المضاد الثانوي. بصرف النظر عن الأجسام المضادة ، مشتق أندروستيرون ، نازعة هيدروجين 3α-هيدروكسيستيرويد ، ثيو NAD ، و NADHهيتستخدم لبناء نظام دورة إنزيم thio-NAD. أثناء تفاعل دورة thio-NAD ، تراكم thio-NADH باستمرار بطريقة رقم مثلث ويمكن قياسه مباشرة عند امتصاص 405 نانومتر.

4. مقارنة ELISA و NAAT فائقة الحساسية في الكشف عن بروتين حمى الضنك NS1

في NAAT ، 60 عينة إيجابية حمى الضنك ، و 25 عينة سلبية حمى الضنك. تراوحت قيمة عتبة دورة NAAT (CT) لتلك العينات الموجبة لحمى الضنك من 12.42 إلى 31.41.في ELISA فائقة الحساسية ، 59 عينة إيجابية في المقابل لنتائج NAAT ، في حين أن 25 عينة سلبية تماما مع نتائج NAAT.

بالمقارنة مع NAAT ، فإن حساسية وخصوصية ELISA فائقة الحساسية هي 98.3٪ و 100٪ على التوالي (الجدول 2). من بين 60 عينة من المرضى الإيجابيين لحمى الضنك المؤكدة من قبل NAAT ، كانت عينة واحدة فقط سلبية في ELISA فائقة الحساسية. أظهرت بيانات NAAT أن العينة هي حالة عدوى من النوع 4 DENV بقيمة CT تبلغ 21.59. تتفق نتائج ELISA فائقة الحساسية بشكل مثالي تقريبا مع نتائج NAAT ، بقيمة كابا تبلغ 0.972 (95٪ CI: 0.917-1.0).

5. الخاتمة

طريقة ELISA فائقة الحساسية سهلة التنفيذ ولا تتطلب أي متدربين محترفين للتشغيل. يمكن بدء الكشف فور تلقي عينة صغيرة. وهي مناسبة بشكل خاص للكشف المبكر عن مرض حمى الضنك في البلدان منخفضة الدخل.

مرجع

Chen، Po-Kai et al. "طريقة الكشف المتقدمة عن بروتين حمى الضنك NS1 باستخدام ELISA فائق الحساسية مع Thio-NAD Cycling." الفيروسات المجلد 15،9 1894. 8 سبتمبر 2023 ، doi: 10.3390 / v15091894

مزايا المنتج وخصائصهبونتاك ثيو ناد / إس ناد

بونتاك هو سNE من الشركات القليلة فيالصينالتي يمكن أن تنتج Thio-NADمع"بونزيم"طريقة إنزيمية كاملة(صديقة للبيئة;لا توجد بقايا مذيبات ضارة) و تقنية تنقية فريدة من نوعها "Bonpure" من سبع خطوات. تدمج BONTAC البحث والتطوير والإنتاج والبيع مع مصانع مملوكة ذاتيا وعدد من الشهادات الدولية لضمان الجودة العالية والإمداد المستقر للمنتجات.

اخلاء المسؤوليه

لا تتحمل بونتاك أي مسؤولية عن أي مطالبات تنشأ بشكل مباشر أو غير مباشر عن اعتمادك على المعلومات والمواد الموجودة على هذا الموقع.