01 يناير
مزايا غير عادية ل ELISA فائقة الحساسية مع Thio-NAD Cycling في تحديد بروتين حمى الضنك NS1
1. مقدمة
حمى الضنك مرض معد حاد يسببه فيروس حمى الضنكمن خلال لدغة أنواع الزاعجة المصابة (Ae. aegypti أو Ae. albopictus) البعوض ، مع الأعراض الرئيسية مثل ارتفاع درجة الحرارة والدوخة والصداع والطفح الجلدي و شديدآلام (آلام العين أو العضلات أو المفاصل أو العظام) ، إلخ. ينتشر هذا المرض على نطاق واسع في المناخات الاستوائية وشبه الاستوائية. ويقدر أن ما يتراوح بين 100 و400 مليون شخص يصاب بالعدوى كل عام، حيث يكون أكثر من 80٪ منهم عادة خفيفين ولا تظهر عليهم أعراض. ومع ذلك، يمكن لحمى الضنك الشديدة أن تزيد من خطر الوفاة إذا لم تعالج بشكل صحيح. وبالتالي ، فإن التشخيص المبكر لهذا المرض مهم لعلاجه في الوقت المناسب.وتجدر الإشارة إلى أن البروتين غير الهيكلي 1 (NS1) ، وهو بروتين سكري محفوظ للغاية ، يفرز بشكل رئيسي أثناء الإصابة ب حمي الضنك فيروس، والذي يعتبر بشكل مكثف عامل التسبب الرئيسي في حمى الضنك. ومن ثم ، يستخدم NSI بشكل عام كمؤشر حيوي للكشف المبكر عن هذا المرض.
في هذه الدراسة ، اختبار الممتز المناعي المرتبط بإنزيم الساندويتش(اليسا)بالاشتراك مع ثيو نيكوتيناميد الأدينين ثنائي النوكليوتيد (THIO-NAD / S-NAD) طريقة ركوب الدراجات (فيما يلي تسمى ELISA فائقة الحساسية) للكشف عن NSI، متبوعا بالمقارنة مع NAAT للتأكد من دقة اكتشافها.
2. مزايا وعيوب طرق الكشف التقليدية ل حمى الضنك
في الوقت الحاضر ، رفيما يلي أربع طرق رئيسية للكشف من أجل حمى الضنك.
يتميز عزل الفيروس وتحديده بخصوصية عالية ولكنه يستغرق وقتا طويلا ، ويستغرق 5 أيام على الأقل. يعد اختبار المستضد السريع هو الأسرع والأكثر فعالية من حيث التكلفة بين الطرق الأخرى ، لكن الحساسية والنوعية منخفضة نسبيا. يقتصر الاختبار المصلي المستند إلى IgM و IgG على عدد أيام الإصابة ، مثل ال يجب تأخير الاختبار حتى يرتفع مستوى الأجسام المضادة إلى مستوى يمكن اكتشافه.
في العيادة ، غالبا ما يتم تطبيق NAAT لتحديد حمى الضنكعن طريق الأوساخ من حساسيتها العالية وخصوصيتها. ومع ذلك ، فإن هذه الطريقة باهظة الثمن وشاقة وعرضة للإيجابية الزائفة ، والتي يجب أن يتم إجراؤها من قبل الموظفين المدربين. للتغلب على عيوب هذه الطرق ، طريقة كشف جديدة ELISA فائقة الحساسية هي مطبق في هذه الدراسة.
3. سير عمل ELISA فائقة الحساسية مع ركوب الدراجات thio-NAD
زوج من الأجسام المضادة هليستخدم لالتقاط بروتين NS1 في شطيرة ELISA والفوسفاتيز القلوي هلالمسمى على الجسم المضاد الثانوي. بصرف النظر عن الأجسام المضادة ، مشتق من الاندروستيرون ، نازعة هيدروجين 3α-hydroxysteroid ، thio-NAD ، و NADH هيتستخدم لبناء نظام دورة إنزيم thio-NAD. أثناء تفاعل دورة thio-NAD ، تراكمت thio-NADH باستمرار بطريقة رقم مثلثة ويمكن قياسها مباشرة عند امتصاص 405 نانومتر.
4. مقارنة ELISA و NAAT شديد الحساسية في الكشف عن بروتين حمى الضنك NS1
في NAAT ، 60 عينة إيجابية لحمى الضنك ، و 25 عينة سلبية لحمى الضنك. تراوحت قيمة عتبة ركوب الدراجات NAAT (CT) لتلك العينات الإيجابية لحمى الضنك من 12.42 إلى 31.41. في ELISA شديد الحساسية ، 59 عينة إيجابية في المقابل لنتائج NAAT ، في حين أن 25 عينة سلبية تماما لنتائج NAAT.بالمقارنة مع NAAT ، فإن حساسية وخصوصية ELISA فائقة الحساسية هي 98.3٪ و 100٪ على التوالي (الجدول 2). من بين 60 عينة مؤكدة من NAAT إيجابية حمى الضنك ، عينة واحدة فقط سلبية في ELISA شديد الحساسية. أظهرت بيانات NAAT أن العينة هي حالة عدوى من النوع 4 من فيروس حمى الضنك بقيمة CT تبلغ 21.59. تتفق نتائج ELISA فائقة الحساسية بشكل شبه كامل مع نتائج NAAT ، بقيمة كابا تبلغ 0.972 (95٪ CI: 0.917-1.0).
5. الخلاصة
طريقة ELISA فائقة الحساسية سهلة التنفيذ ولا تتطلب متدربين محترفين للعمل. يمكن بدء الكشف فور تلقي عينة صغيرة. وهو مناسب بشكل خاص للكشف المبكر عن مرض حمى الضنك في البلدان منخفضة الدخل.مرجع
تشين ، بو كاي وآخرون "طريقة الكشف المتقدمة لبروتين حمى الضنك NS1 باستخدام ELISA شديد الحساسية مع دورة Thio-NAD." الفيروسات المجلد 15،9 1894. 8 سبتمبر 2023 ، دوي:10.3390 / v15091894مزايا المنتج والميزات بونتاك ثيو-ناد / إس-ناد
بونتاك هو oNE من الشركات القليلة في الصينالتي يمكن أن تنتج Thio-NADمع "بونزيم"طريقة إنزيمية كاملة(صديقة للبيئة;لا توجد بقايا مذيبات ضارة) و تقنية تنقية فريدة من نوعها "Bonpure" المكونة من سبع خطوات. تدمج BONTAC البحث والتطوير والإنتاج والبيع مع المصانع المملوكة ذاتيا وعدد من الشهادات الدولية لضمان جودة عالية وإمدادات مستقرة للمنتجات.