القياس الكمي NAD+ ومستقلباته في الأعصاب الوركية للفأر
10 أبريل 2024
مقدمة
تم التعرف على الأجزاء الحاسمة من نيكوتيناميد الأدينين ثنائي النوكليوتيد (NAD +) ومستقلباته في الشيخوخة والتنكس العصبي على نطاق واسع. لتحفيز التقدم نحو البحوث والتدخلات البيوكيميائية التي تستهدف الشيخوخة والأمراض التنكسية العصبية ، من الأهمية بمكان تحديد NAD + بدقة ومستويات الأيض الخاصة به في مسار إنقاذ NAD +. هنا ، يتم تطبيق طريقة LC-MS / MS قوية ودقيقة لتحديد مستويات NAD + ومستقلباته في العصب الوركي الطبيعي والمصاب للفأر.حدود الطرق الحالية لقياس NAD+ ومستقلباته
تواجه الطرق التقليدية لقياس NAD + ومستقلباته ، مثل HPLC-UV أو الرنين المغناطيسي النووي أو الرحلان الكهربائي لمنطقة الشعيرات الدموية أو المقايسات الأنزيمية اللونية ، تحديات مختلفة في الحساسية والانتقائية والقياس غير المباشر. أما بالنسبة لفحوصات LC-MS / MS الحالية لقياسات NAD + الخلوية أو الأنسجة ومستقلباتها ، فلا يزال هناك العديد من الصعوبات التي يجب التغلب عليها ، مثل أوقات التشغيل الممتدة ، وسلوك الاحتفاظ الكروماتوجرافي الضعيف ، وأشكال الذروة غير المرضية. علاوة على ذلك ، يمكن تغطية مادة واحدة إلى ثلاث مواد فقط في مسار الإنقاذ NAD + بهذه الطرق.تعديلات طريقة LC-MS / MS
على أساس مقايسات LC-MS / MS الحالية ، يتم إجراء التعديلات المتعلقة بالظروف الكروماتوغرافية والمصفوفة البديلة وشروط MS / MS. على وجه التحديد ، يتم استخدام 5 ميكرومتر من حمض الميثيلين فوسفونيك كمادة مضافة للطور المتحرك ، والتي تعزز بشكل صريح شدة الإشارة وشكل الذروة. نظرا للطبيعة النظيفة والبسيطة نسبيا للعينات أبدا وصغر حجمها ، يتم اختبار المياه فائقة النقاء كمصفوفة بديلة. بدلا من عمود كروماتوغرافيا سائل التفاعل المحب للماء وعمود hypercarb ، يتم استخدام عمود Waters Atlantis Premier BEH C18 AX ، الذي تتيح تقنية السطح عالية الأداء MaxPeak HPS الفريدة (تخميل الجدار الداخلي للعمود ، والقضاء على السطح المعدني) قابلية عالية للتكاثر ، وتناظر الذروة ، وفصل خط الأساس لجميع المواد التحليلية. إلى جانب ذلك ، تم تحسين ظروف MS لتقليل إشارة تداخل NAD + في قناة ريبوز الأدينوزين ثنائي فوسفات الدوري (cADPR) مع الحفاظ على استجابة cADPR و nicotinamide أحادي النوكليوتيد (NMN) ، مع 4000 فولت لجهد الرش الأيوني ، و 450 درجة مئوية لدرجة حرارة سخان توربو ، و 50 رطل لكل بوصة مربعة للغاز 1 ، و 50 رطل لكل بوصة مربعة للغاز 2 ، و 30 رطل لكل بوصة مربعة لغاز الستائر ، و 12 رطل لكل بوصة مربعة لغاز الاصطدام.
كروماتوجرام تمثيلي لعينات الأعصاب (عادي مقابل مصاب)
تحقق جميع التحليلات الخمسة فصلا أساسيا ، حيث يعد cADPR علامة حيوية حساسة في نموذج التنكس العصبي. هنا ، يؤدي بضع العصب الوركي إلى تنكس محوري ، مما يؤدي إلى انخفاض مستوى NAD + وارتفاع مستوى NMN في الأعصاب المصابة ، مما يؤدي إلى زيادة حوالي 2 ضعف في نسبة NMN / NAD +. في الوقت نفسه ، تنخفض مستويات نيكوتيناميد (NAM) وأدينوسين ثنائي فوسفات الريبوز (ADPR) بنحو 2 أضعاف ، بينما يزداد مستوى cADPR بأكثر من 8 أضعاف. تتوافق هذه النتائج مع نتائج الأبحاث التي تم الإبلاغ عنها سابقا ، مما يؤكد دقة طريقة LS-MS / MS المعدلة هذه في القياس الكمي ل NAD + ومستقلباته.
استنتاج
تتيح طريقة LC-MS / MS المعدلة هذه الفصل الأساسي الفعال ل NAD + و NMN و NAM و ADPR و cADPR في غضون فترة تشغيل قصيرة تبلغ 5 دقائق ، مما يساهم في التشخيص المبكر لمختلف الاضطرابات العصبية وتطوير الأدوية للشيخوخة والأمراض التنكسية العصبية.مرجع
Ma Y، Deng L، Du Z. تطوير والتحقق من صحة طريقة LC-MS / MS لقياس NAD + والمستقلبات ذات الصلة في الأعصاب الوركية للفئران وتطبيقها على نموذج حيواني لإصابة الأعصاب. J كروماتوجر أ. دوى: 10.1016 / j.chroma.2024.464821بونتاك ناد
تم تخصيص BONTAC للبحث والتطوير وتصنيع وبيع المواد الخام للأنزيم والمنتجات الطبيعية منذ عام 2012 ، مع مصانع مملوكة ذاتيا ، وأكثر من 170 براءة اختراع عالمية بالإضافة إلى فريق قوي للبحث والتطوير. تتمتع BONTAC بخبرة غنية في البحث والتطوير والتكنولوجيا المتقدمة في التخليق الحيوي ل NAD وسلائفها (على سبيل المثال. NMN و NR). هناك أنواع مختلفة من NAD ليتم اختيارها ، بما في ذلك NAD ER Grade (إزالة endoxin) ، NAD Grade I (IVD / المكملات الغذائية / مسحوق خام مستحضرات التجميل) ، NAD Grade II (API / وسيطة) و NAD Grade IV (إن وجدت متطلبات أعلى على الذوبان) ، والتي يمكن توفيرها في شكل مسحوق مجفف بالتجميد أو مسحوق بلوري. يمكن أن تصل نقاء BONTAC NAD إلى أكثر من 98٪.
