مزايا استثنائية ل ELISA فائقة الحساسية مع دورة Thio-NAD في تحديد بروتين حمى الضنك NS1
15 يناير 2024
1. مقدمة
حمى الضنك هي مرض معد حاد يسببه فيروس حمى الضنك من خلال لدغة بعوضة من نوع الزاعجة المصاب (Ae. aegypti أو Ae. albopictus) ، مع الأعراض الرئيسية مثل ارتفاع درجة الحرارة والدوخة والصداع والطفح الجلدي والآلام الشديدة (آلام العين أو العضلات أو المفاصل أو العظام) ، إلخ. ينتشر هذا المرض على نطاق واسع في المناخات الاستوائية وشبه الاستوائية. يصاب ما يقدر بنحو 100 إلى 400 مليون شخص كل عام ، حيث يكون أكثر من 80٪ منهم عادة خفيفين وبدون أعراض. ومع ذلك ، يمكن أن تزيد حمى الضنك الشديدة من خطر الوفاة إذا لم يتم علاجها بشكل صحيح. وبالتالي ، فإن التشخيص المبكر لهذا المرض مهم لعلاجه في الوقت المناسب. وتجدر الإشارة إلى أن البروتين غير الهيكلي 1 (NS1) ، وهو بروتين سكري محفوظ بدرجة عالية ، يفرز بشكل رئيسي أثناء الإصابة بفيروس حمى الضنك ، والذي يعتبر بشكل مكثف العامل الرئيسي لحمى الضنك. وبالتالي ، يستخدم NSI بشكل عام كعلامة حيوية للكشف المبكر عن هذا المرض. في هذه الدراسة ، تم استخدام مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) بالاشتراك مع طريقة ركوب الدراجات ثيو نيكوتيناميد الأدينين ثنائي النوكليوتيد (thio-NAD / S-NAD) (المشار إليها فيما يلي باسم ELISA فائقة الحساسية) للكشف عن NSI ، تليها المقارنة مع NAAT لتأكيد دقة اكتشافها.2. مزايا وعيوب طرق الكشف التقليدية عن حمى الضنك
في الوقت الحاضر ، هناك أربع طرق رئيسية للكشف عن حمى الضنك.
تتميز العزلة الفيروسية وتحديدها بخصوصية عالية ولكنها تستغرق وقتا طويلا ، وتستغرق 5 أيام على الأقل. اختبار المستضد السريع هو الأسرع والأكثر فعالية من حيث التكلفة بين الطرق الأخرى ، لكن الحساسية والنوعية منخفضة نسبيا. يقتصر الاختبار المصلي القائم على IgM و IgG على عدد أيام الإصابة ، حيث يجب تأخير الاختبار حتى يرتفع مستوى الأجسام المضادة إلى مستوى يمكن اكتشافه. في العيادة ، غالبا ما يتم تطبيق NAAT لتحديد حمى الضنك عن طريق الأوساخ من حساسيتها العالية ونوعيتها. ومع ذلك ، فإن هذه الطريقة مكلفة وشاقة وعرضة للإيجابية الكاذبة ، والتي يجب أن يقوم بها الموظفون المدربون. للتغلب على عيوب هذه الطرق ، يتم تطبيق طريقة كشف جديدة فائقة الحساسية ELISA في هذه الدراسة.
3. سير عمل ELISA فائقة الحساسية مع ركوب الدراجات thio-NAD
يستخدم زوج من الأجسام المضادة لالتقاط بروتين NS1 في شطيرة ELISA ، ويتم تمييز الفوسفاتيز القلوي على الجسم المضاد الثانوي. بصرف النظر عن الأجسام المضادة ، يتم استخدام مشتق أندروستيرون ، 3α-hydroxysteroid dehydrogenase ، thio-NAD ، و NADH لبناء نظام دورة إنزيم thio-NAD. أثناء تفاعل دورة thio-NAD ، تراكم thio-NADH باستمرار بطريقة رقم مثلث ويمكن قياسه مباشرة عند امتصاص 405 نانومتر.
4. مقارنة بين ELISA فائقة الحساسية و NAAT في الكشف عن بروتين حمى الضنك NS1
في NAAT ، 60 عينة إيجابية لحمى الضنك ، و 25 عينة سلبية لحمى الضنك. تراوحت قيمة عتبة دورة NAAT (CT) لتلك العينات الإيجابية لحمى الضنك من 12.42 إلى 31.41. في ELISA فائقة الحساسية ، 59 عينة إيجابية المقابلة لنتائج NAAT ، في حين أن 25 عينة سلبية تماما لنتائج NAAT. بالمقارنة مع NAAT ، فإن حساسية وخصوصية ELISA فائقة الحساسية هي 98.3 ٪ و 100 ٪ ، على التوالي (الجدول 2). من بين 60 عينة مريض إيجابية لحمى الضنك مؤكدة من NAAT ، هناك عينة 1 فقط سلبية في ELISA شديدة الحساسية. أظهرت بيانات NAAT أن العينة هي حالة عدوى من النوع 4 DENV بقيمة CT تبلغ 21.59. تتوافق نتائج ELISA فائقة الحساسية تماما تقريبا مع نتائج NAAT ، بقيمة كابا تبلغ 0.972 (95٪ CI: 0.917-1.0).
5. خاتمة
طريقة ELISA فائقة الحساسية سهلة التنفيذ ولا تتطلب أي متدربين محترفين للعمل. يمكن بدء الكشف فور استلام عينة صغيرة. وهي مناسبة بشكل خاص للكشف المبكر عن مرض حمى الضنك في البلدان المنخفضة الدخل.مرجع
Chen، Po-Kai et al. "طريقة الكشف المتقدمة لبروتين حمى الضنك NS1 باستخدام ELISA فائقة الحساسية مع Thio-NAD Cycling." الفيروسات المجلد 15,9 1894. 8 سبتمبر 2023، دوى: 10.3390/v15091894مزايا المنتج وميزات بونتاك ثيو ناد / إس ناد
BONTAC هي واحدة من الشركات القليلة في الصين التي يمكنها إنتاج Thio-NAD ، مع طريقة "Bonzyme" الأنزيمية الكاملة (صديقة للبيئة ؛ لا توجد بقايا مذيبات ضارة) وتقنية تنقية فريدة من نوعها "Bonpure" من سبع خطوات. BONTAC intergrates البحث والتطوير والإنتاج والبيع ، مع المصانع المملوكة ذاتيا وعدد من الشهادات الدولية لضمان الجودة العالية والإمداد المستقر للمنتجات.
